大屏幕紫外分光光度計依據(jù)是比耳定律定量測定，即物質(zhì)在一定濃度的吸光度與它的吸收介質(zhì)的厚度呈正比。許多有機化合物在紫外區(qū)具有特征的吸收光譜，因此可用分光光度計法對有機物質(zhì)進(jìn)行定性鑒定，結(jié)構(gòu)分析及定量測定.其基本工作原理和紅外光譜儀相似，利用一定頻率的紫外--可見光照射被分析的有機物質(zhì)，引起分子中價電子的躍遷，它將有選擇地被吸收。一組吸收隨波長而變化的光譜，反映了試樣的特征。在紫外可見光的范圍內(nèi)，對于一個特定的波長，吸收的程度正比于試樣中該成分的濃度，因此測量光譜可以進(jìn)行定性分析，而且根據(jù)吸收與已知濃度的標(biāo)樣的比較，還能進(jìn)行定量分析。分光光度計就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。
大屏幕紫外分光光度計在各種不同之處的應(yīng)用：
1.氫鍵強度的測定
不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強度也不同，這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強度，以確定選擇哪一種溶劑。
2.檢定物質(zhì)
根據(jù)吸收光譜圖上的一些特征吸收，特別是吸收波長λmax和摩爾吸收系數(shù)ε，是檢定物質(zhì)的常用物理參數(shù)。
3.比較吸收波長吸收系數(shù)的一致性
由于紫外吸收光譜只含有2～3個較寬的吸收帶，而紫外光譜主要是分子內(nèi)的發(fā)色團在紫外區(qū)產(chǎn)生的吸收，與分子和其它部分關(guān)系不大。具有相同發(fā)色團的不同分子結(jié)構(gòu)，在較大分子中不影響發(fā)色團的紫外吸收光譜，不同的分子結(jié)構(gòu)有可能有相同的紫外吸收光譜，但它們的吸收系數(shù)是有差別的。如果分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸收波長相同，吸收系數(shù)也相同，則可認(rèn)為分析樣品與標(biāo)準(zhǔn)樣品為同一物質(zhì)。
4.絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測定
金屬離子常與有機物形成絡(luò)合物，多數(shù)絡(luò)合物在紫外可見區(qū)是有吸收的，可以利用分光光度法來研究其組成。
5.反應(yīng)動力學(xué)研究
借助于分光光度法可以得出一些化學(xué)反應(yīng)速度常數(shù)，并從兩個或兩個以上溫度條件下得到的速度數(shù)據(jù)，得出反應(yīng)活化能。
6.與標(biāo)準(zhǔn)物及標(biāo)準(zhǔn)圖譜對照
將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應(yīng)*一致。如果沒有標(biāo)樣，也可以和現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)譜圖對照進(jìn)行比較。這種方法要求儀器準(zhǔn)確，精密度高，且測定條件要相同。
7.純度檢驗
紫外吸收光譜能測定化合物中含有微量的具有紫外吸收的雜質(zhì)。如果化合物的紫外可見光區(qū)沒有明顯的吸收峰，而它的雜質(zhì)在紫外區(qū)內(nèi)有較強的吸收峰，就可以檢測出化合物中的雜質(zhì)。
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